CD0004

磁珠法口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒

预期用途

本试剂盒适用于人唾液、口腔黏液、口腔拭子等样品中快速提取、纯化基因组DNA的试剂盒，样品经简单预处理后直接提取，提取产物纯度高，片段完整，可用于后续各种分子生物学实验，如酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交等。本试剂盒仅用于科研用途，请勿用于临床诊断使用。

室温保存（15-30℃），有效期为12个月

试剂名称       　 　 　 　 　　　　　　　规格

裂解液　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　   4 mL

蛋白酶混合液　　　　                             400 μL

磁珠 　 　 　 　 　                                   200 μL

洗液一（需加乙醇）                                 6 mL

洗液二（需加乙醇）                                 6 mL

洗脱液　　　 　 　 　                      　    1.2 mL

注：使用前各加6 mL无水乙醇（分析纯）至洗液一和洗液二瓶中

核酸提取纯化准备：

1. 裂解液如有沉淀，请于 56℃ 温浴至沉淀完全溶解后使用。

2. 使用前，使用前各加 6 mL 无水乙醇（分析纯）至洗液一和洗液二瓶中，混匀，并做好标记（确保瓶盖拧紧，防止乙醇挥发）

提取纯化步骤：

1.取待检样本 200 μL，依次加入 20 μL蛋白酶混合液、200 μL 裂解液，漩涡振荡 10 s，56°C孵育 10 分钟。           

2.然后加入 300 μL 异丙醇和 10 μL 磁珠，漩涡振荡 10 s，上下颠倒离心管 10 次，使管内磁珠分布均匀。

3.静置离心管 10 分钟，每隔两分钟上下颠倒离心管 5 次，使管内磁珠分布均匀。

4.将离心管置于离心机上，8000 g 离心 1 min，用移液器吸去管内液体。

5.加入 600 μL 洗液一，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡 10 s，直至其分布均匀。

6.将离心管置于离心机上，8000 g 离心 1 min。用移液器吸去管内液体。

7.加入 600 μL 洗液二，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡 10 s，直至其分布均匀。

8.将离心管置于离心机上，8000 g 离心 1 min。用移液器吸去管内液体。

9.加入 600 μL 的 80% 乙醇，用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡 10 s，直至其分布均匀。

10.将离心管置于离心机上，8000 g 离心 1 min。用移液器吸去管内液体。

11.将离心管置于离心机上，8000 g 离心 30 s。用移液器吸去管内残余液体。

12.打开管盖，室温干燥 2 分钟。

13.加入 60 μL 洗脱液，用移液器枪头打散管壁磁珠，直至其分布均匀。56°C 孵育 3 分钟。

14.将离心管置于离心机上，10000 g 离心 1 min。吸取上清至一个无核酶干净的离心管中，此即为纯化后的核酸溶液。

1.恒温水浴锅，Votex，高速离心机

2.无水乙醇，异丙醇

1.所有吸弃上清的操作都不能将磁珠吸出。

2.每次洗涤都需要移液器枪头轻柔打散管壁磁珠，漩涡振荡 10 s，直至其分布均匀。

3.裂解液必须完全溶解为均一液体，如果出现浑浊或者沉淀，请将其置于 37-56℃ 孵育直至澄清。

4.本试剂盒涉及的检测样本应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》相关要求。