1. 取待检病毒样本 200 μL,依次加入 20 μL 蛋白酶混合液、200 μL 裂解液,漩涡振荡 10 s,56°C 孵育 10 分钟。 2. 然后加入 300 μL 异丙醇和 2 μL 磁珠,漩涡振荡 10 s,使管内磁珠分布均匀。 3. 静置离心管 10 分钟,每隔两分钟上下颠倒离心管 5次,使管内磁珠分布均匀。 4. 将离心管置于离心机上,8000 g 离心 1 min,用移液器吸去管内液体。 5. 加入 600 μL 洗液一,用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠,漩涡振荡10 s,直至其分布均匀。 6. 将离心管置于离心机上,8000 g 离心 1 min。用移液器吸去管内液体。 7. 加入 600 μL 洗液二,用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠,漩涡振荡 10 s,直至其分布均匀。 8. 将离心管置于离心机上,8000 g 离心 1 min。用移液器吸去管内液体。 9. 加入 600 μL 的 80% 乙醇,用移液器枪头轻柔打散管壁磁珠,漩涡振荡 10 s,直至其分布均匀。 10. 将离心管至于离心机上,8000 g 离心 1 min。用移液器吸去管内液体。 11. 将离心管至于离心机上,10000 g 离心 30 s。用移液器吸去管内残余液体。 12. 打开管盖,室温干燥 2 分钟。 13. 加入 60 μL 洗脱液,用移液器枪头打散管壁磁珠,直至其分布均匀。56°C 孵育 3 分钟。 14. 将离心管至于离心机上,10000 g 离心 1 min。吸取上清至一个无核酶干净的离心管中,此即为纯化后的核酸溶液。 |